凡纳滨对虾原肌球蛋白的异源重组表达

李言初 1,2,3 杨玉莹 1 胡卫成 4 刘书成 1,2,3,5 魏 帅 1,2,3,5

（1. 广东海洋大学食品科技学院，广东 湛江 524088；2. 广东省水产品加工与安全重点实验室，广东 湛江 524088；3. 广东省海洋生物制品工程实验室，广东 湛江 524088；4. 扬州大学基础医学院，江苏 扬州 225009；5. 大连工业大学海洋食品精深加工关键技术省部共建协同创新中心，辽宁 大连 116034）

摘要：［目的］获得重组原肌球蛋白（tropomyosin，TM）。［方法］先从 National Center of Biotechnology Information（NCBI）数据库获得 TM 同源蛋白的基因序列，并据此设计特异性引物，再以凡纳滨对虾虾肉 cDNA 为模板，PCR 扩增并测序分析了凡纳滨对虾 TM 编码基因序列，最后利用大肠杆菌异源重组表达载体 pET29a，构建了凡纳滨对虾 TM 的原核重组表达体系。［结果］RNA 样品经琼脂糖凝胶电泳后，条带清晰明亮、泳道无弥散区，cDNA 样品在 300 bp 左右有清晰条带，说明该研究成功提取了结构完整的凡纳滨对虾虾肉总 RNA 样品并反转录合成了 cDNA。PCR 结果表明，凡纳滨对虾 TM 编码基因在 900 bp 处有单一条带，基因序列 Blast比对结果显示克隆的 TM 编码基因与已知凡纳滨对虾 TM 编码基因高度同源（99.77%）。该研究进一步构建了 TM 重组表达载体 pET29a-TM，SDS-PAGE 结果显示其在表达宿主菌中高效表达了目标蛋白，获得了相对分子质量约为 3.7×104的可溶性重组 TM 蛋白条带。［结论］该研究克隆了凡纳滨对虾 TM 编码基因并构建其原核表达体系，高效地获得了可溶性重组 TM 蛋白。

关键词：原肌球蛋白；食物过敏；凡纳滨对虾；基因克隆；重组表达

全文下载地址:凡纳滨对虾原肌球蛋白的异源重组表达_李言初

引用格式： 李言初，杨玉莹，胡卫成，等 . 凡纳滨对虾原肌球蛋白的异源重组表达［J］. 食品与机械，2025，41（11）：1-8.

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